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  操作规程
 
安捷伦高效液相色谱仪的操作方法
双击自动滚屏 发布者:郑州宝晶电子科技新华彩票 发布时间:2019/10/17 阅读:1860416

安捷伦高效液相色谱仪的规范操作

1. 目的:明确安捷伦高效液相色谱仪的规范操作,确保数据的准确性。

2. 范围:适用于安捷伦高效液相色谱仪。

3. 职责:检验人员对此负责。

4. 操作规程:

4.1 系统组成

本系统由1个溶剂二元输送泵(分主/A泵和副/B泵)、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。

4.2 准备

4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相,用合适的0.45μm滤膜过滤,超声脱气20min。

4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱(柱进出口位置应与流动相流向一致)和定量环。

4.2.3 配制样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),用合适的0.45μm滤膜过滤。

4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常

4.1 将待测样品按要求前处理,准备HPLC 所需流动相,检查线路是否连接完好,废液瓶是否够用等。

4.3开机:

4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。

4.3.2 打开 1200 LC 各模块电源。

4.3.3 待各模块自检完成后,双击[Instrument 1 Online]图标,化学工作站自动与1200LC通讯,进入的工作站画面如下所示。

4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部工具栏], [ 显示状态工具栏],[系统视图],[样品视图],使其命令前有[√]标志,来调用所需的界面。

4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。

4.3.6 打开冲洗阀。

4.3.7 点击[泵]图标,点击[设置泵…]选项,进入泵编辑画面。

4.3.8 设流速:5ml/min,点击[确定]。

4.3.9 点击[泵] 图标,点击[控制…]选项,选中[启动],点击[确定] ,则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止。

4.3.10 点击[泵] 图标,点击[控制…]选项,选中[关闭],点击[确定]关泵, 关闭冲洗阀。

4.3.11 点击[泵]图标,点击 [设置泵…选项],设流速:1.0ml/min。

4.3.12 点击泵下面的瓶图标,如下图所示(以单元泵为例),输入溶剂的实际体积和瓶体积。 也可输入停泵的体积,点击[确定]。

4.4 数据采集方法编辑

4.4.1开始编辑完整方法:从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项,如下图所示选中除[数据分析 ]外的三项,点击[确定],进入下一画面。

4.4.2方法信息

4.4.2.1在[方法注释]中加入方法的信息(如:测试方法)。

4.4.2.2 点击 [确定], 进入下一画面。

4.4.3 泵参数设定

4.4.3.1 在[流速]处输入流量,如1ml/min,在[溶剂 B]处输入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[时间表] ,编辑梯度。在[压力限]处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。

4.4.3.2 点击[确定],进入下一画面。

4.4.4 柱温箱参数设定

4.4.4.1 在[温度]下面的空白方框内输入所需温度,如:40度。并选中它,点击[更多>>] 键,如图所示,选中[与左侧相同],使柱温箱的温度左右一致。

4.4.4.2 点击[确定],进入下一画面。

4.4.5 检测器参数设定:检测波长:一般选择最大吸收处的波长。样品带宽:一般选择最大吸收值一半处的整个宽度

参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域 。

                         参比带宽:至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用100nm作为缺省值。同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值。选中所用的灯。

4.4.6 在[ 运行时选项表 ]中选中[ 数据采集],点击[确定]。

4.4.7 点击[方法]菜单,选中[方法另存为…],输入一方法名,如[测试],点击[确定]。

4.4.8 从菜单 [视图]中选中[在线信号],选中[信号窗口1],然后点击[改变…] 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击[确定]。(如同时检测二个信号,则重复10,选中[信号窗口2]。单击[改变]键,即可弹出右侧的[编辑信号图谱]窗口,进而选择所需的谱图信号。

4.4.9 从[运行控制]菜单中选择[样品信息]选项,如下图所示,输入操作者名称,如[安装工程师];在[数据文件 ]中选择[手动]或[前缀/计数器]。区别: 手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。 Pr—在前缀/计数器----[前缀]框中输入前缀,在[计数器]框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd数据0001,vwd数据0002……。

4.4.10 点击[确定] ,从[仪器] 菜单选择[系统开启]。

4.4.11 等仪器准备好,基线平稳,用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量。

4.5 数据分析方法编辑:

4.5.1 从[视图]菜单中,点击[数据分析]进入数据分析画面。

4.5.2 从[文件]菜单选择[调用信号],选中您的数据文件名,如下图所示。点击[ 确定],则数据被调出。

4.5.3做谱图优化:从[图形]菜单中选择[信号选项],如下图所示。从[范围] 中选择[满量程] 或[自动量程] 及合适的时间范围或选择[自定义量程] 调整。反复进行,直到图的比例合适为止。点击[ 确定]。

4.6积分:

4.6.1 从[积分]菜单中选择[积分事件]选项,如下图所示。选择合适的[斜率灵敏度],[峰宽],[最小峰面积],[最小峰高]。

4.6.2 从[积分]菜单中选择[积分]选项, 则数据被积分。

4.6.3如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。

4.6.4点击左边[√]图标,将积分参数存入方法。

4.7打印报告:

4.7.1从[报告]菜单中选择[设定报告]选项,进入如下图所示画面。

4.7.2 点击[定量结果]框中[计算]右侧的黑三角,选中[面积百分比],其它选项不变。

4.7.3 点击[ 确定]。

4.7.4 从[报告]菜单中选择[打印报告],则报告结果将打印到屏幕上,如想输出到打印机上,则点击[报告] 底部的[打印]钮。

4.8关机:关机前,先关灯,用相应的溶剂充分冲洗系统。退出化学工作站,依提示关泵,及其它窗口,关闭计算机。关闭Agilent 1200各模块电源开关。

4.9. 液相色谱日常维护

4.9.1. 贮液器

清洁是保持流动相贮液器正常使用的关键,要尽可能使用HPLC级的溶剂和试剂含有缓冲盐和非HPLC级的流动相一定要通过0.45μm的过滤器以除去其中的微粒物质。改变流动相时应防止交叉污染,陈旧的流动相和用久了的试剂瓶应定期废弃,防止生长微生物和组分改变。贮器内壁定期清洗,里面的附件要经常更换。

4.9.2. 泵

泵的密封圈是最易磨损的部件,密封垫圈的损坏可引起系统的许多故障。采取下列措施可以延长垫圈的寿命:

A 每天要把泵中的缓冲液体洗干净,防止盐沉积,泵要浸在无缓冲液的溶液或有机溶剂中;

B 用HPLC级试剂;

C 用烧结不锈钢沉子。要注意防止因泵阻塞造成压力过高而损坏柱塞杆或烧坏电机。

4.9.3. 进样器

停机后要用溶剂冲洗干净进样器内残留的样品和缓冲盐,防止无机盐沉积和样品微粒造成阀转子面磨损或阻塞,严禁用气相色谱那样的尖针头进样。

4.9.4. 色谱柱

防止柱性能下降有以下几方面的措施:

A 溶剂的化学腐蚀不能太强;

B 避免微粒在柱头沉降;

C 泵上要装压力限制器,防止压力过高冲击大;

D 流动相pH>7时用大粒度同种填料作预柱;

E 柱头加烧结片不锈钢滤片,需要时加保护柱;

4.9.5. 检测器

要保持检测器清洁,每天用后连同色谱柱柱一起冲洗。提倡不定期用强溶剂

反向冲洗检测池(拆开柱)。用脱过气的流动相,防止空气泡卡在池内。检测器灯有一定的寿命,不用时不要打开灯。

5.0. 当仪器出现故障时应及时与厂家联系,使用人员不得擅自拆开维修。

5.1. 使用人员应经过培训的且熟练操作仪器,每次使用应进行使用登记。

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